PMCA4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402888-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PMCA4 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- PMCA4ダブルニカースプラスミド（h）およびPMCA4ダブルニカースプラスミド（h2）は、ATP2B4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PMCA4 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402888-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PMCA4 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402888-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP2B4は、細胞質内のCa2+を排出してカルシウム恒常性を維持し、Ca2+依存性シグナルの振幅と持続時間を規定するP型ATPアーゼである形質膜Ca2+-ATPase 4（PMCA4）をコードします。PMCA4は、興奮収縮連関、一酸化窒素（NO）シグナル伝達、Ca2+依存性の転写プログラムなどの過程に影響する局所的なCa2+マイクロドメインを制御します。形質膜でのCa2+クリアランスを担うことで、PMCA4はカルモジュリン依存的な制御や、その下流のキナーゼ／ホスファターゼ・ネットワークと連携し、細胞の運動性、分泌、増殖を微調整します。ATP2B4の遺伝的多型や発現変動は、赤血球生物学や血管機能に関連する表現型と関連づけられており、カルシウム駆動性の細胞生理を機構的に研究する上での重要性を裏づけています。
PMCA4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ATP2B4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ATP2B4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ATP2B4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ATP2B4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。