PMCA1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402691-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PMCA1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase PMCA1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase PMCA1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ATP2B1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PMCA1 Anticorpo (F-10): sc-398413
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PMCA1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-402691-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PMCA1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-402691-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP2B1 codifica a ATPase transportadora de Ca2+ 1 da membrana plasmática (PMCA1), uma bomba de efluxo de Ca2+ de alta afinidade que mantém baixa a concentração de cálcio no citosol e molda a dinâmica da sinalização dependente de cálcio. A PMCA1 acopla a hidrólise de ATP à extrusão de Ca2+, sustentando processos como excitabilidade, secreção, progressão do ciclo celular e transcrição dependente de cálcio por meio de vias ligadas à calmodulina, à calcineurina/NFAT e à sinalização por CaMK. Ao regular microdomínios locais de Ca2+ na membrana plasmática, a PMCA1 influencia a função endotelial e do músculo liso, a homeostase neuronal e a integridade de barreiras. Perturbações genéticas e funcionais de ATP2B1 têm sido associadas a fenótipos cardiovasculares e neurovasculares, incluindo a regulação da pressão arterial e defeitos no manuseio de cálcio, relevantes para a modelagem mecanística de doenças em células humanas.
PMCA1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ATP2B1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ATP2B1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ATP2B1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ATP2B1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.