PLVAP/PV1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403746-ACT

PLVAP（plasmalemma vesicle–associated protein；形質膜小胞関連タンパク質。PV1とも呼ばれる）は、内皮細胞に特異的に発現する膜糖タンパク質であり、有窓（fenestrae）、カベオラ（caveolae）、および内皮細胞貫通チャネル（transendothelial channels）の隔膜構造（diaphragm）を形成・組織化することで、血管透過性や高分子輸送を制御します。内皮バリア特性や小胞輸送を形づくることを通じて、PLVAPは血管新生に伴うリモデリング、白血球の血管外遊出、組織特異的な微小血管の機能分化といった過程とも関与します。PLVAPの発現変化は、内皮活性化や病的血管新生の指標としてしばしば用いられ、炎症性の血管漏出や腫瘍関連内皮とも関連づけられています。これらの特性により、PLVAPはヒト細胞モデルにおいて、微小血管機能、内皮の分化状態、ならびに透過性に関連する表現型を研究するための有用な着目点となります。

PLVAP/PV1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PLVAPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PLVAP/PV1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PLVAP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPLVAP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PLVAP/PV1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPLVAP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPLVAP/PV1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPLVAP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPLVAP/PV1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。