PLIC-2 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-424895-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PLIC-2O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase PLIC-2 (m) e o Plasmídeo Double Nickase PLIC-2 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Ubqln2. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PLIC-2 Anticorpo (QR-2): sc-100612
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PLIC-2 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-424895-NIC | 20 µg | $410.00 |
O gene Ubqln2 de camundongo codifica a PLIC-2 (ubiquilina-2), um adaptador do tipo ubiquitina/associado à ubiquitina que acopla substratos poliubiquitinados ao proteassoma 26S e dá suporte ao controle de qualidade proteica. A PLIC-2 participa do fluxo do sistema ubiquitina–proteassoma, da degradação associada ao retículo endoplasmático (ERAD) e da remoção de proteínas mal dobradas ou agregadas, influenciando as respostas celulares ao estresse e a proteostase. Por meio de interações com subunidades do proteassoma e cadeias de ubiquitina, ela ajuda a regular a sinalização ligada à degradação e pode afetar a comunicação entre autofagia e proteassoma sob estresse proteotóxico. A desregulação da função da família UBQLN2 tem sido associada a fenótipos de agregação proteica e a vias relevantes para neurodegeneração, tornando a perturbação de Ubqln2 útil para estudos mecanísticos de proteostase neuronal e sinalização de estresse.
PLIC-2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Ubqln2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Ubqln2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Ubqln2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Ubqln2 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.