PLIC-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404783-ACT

ヒトのUBQLN2は、ユビキチン様タンパク質PLIC-2をコードしており、ユビキチン受容体／アダプターとして、ポリユビキチン化された基質を26Sプロテアソームへ結び付け、プロテオスタシスの維持に寄与します。PLIC-2は、ユビキチン依存性のタンパク質品質管理、ER関連分解（ERAD）、およびミスフォールドしたタンパク質や凝集しやすいタンパク質のターンオーバーに関与し、細胞ストレス応答やオートファジーとプロテアソームのクロストークとも関連します。UBQLN2機能の破綻は、異常なタンパク質凝集やクリアランス経路の障害と結び付けられており、ALSや前頭側頭型認知症（FTD）スペクトラムの病理を含む神経変性疾患メカニズムに関連するとされています。ユビキチン‐プロテアソーム系シグナル伝達の結節点として、UBQLN2は神経細胞の恒常性、細胞質内封入体の形成、ならびにプロテオトキシック・ストレス経路の調節における役割の観点から、しばしば研究対象となっています。

PLIC-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UBQLN2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PLIC-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UBQLN2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUBQLN2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PLIC-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUBQLN2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPLIC-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUBQLN2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPLIC-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。