PKD2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m2): sc-430381-LAC-2

O gene Prkd2 de camundongo codifica a proteína quinase D2 (PKD2), uma quinase de serina/treonina da família PKD que transmite sinais a jusante do diacilglicerol e de isoformas novas de PKC para coordenar programas de fosforilação que controlam a expressão gênica, o tráfego vesicular, a dinâmica do citoesqueleto e a sobrevivência celular. A atividade de PKD2 é frequentemente ligada à sinalização associada ao complexo de Golgi e a membranas, integrando entradas de vias de GPCR e de receptores tirosina-quinase para regular respostas associadas a MAPK e NF-κB e o remodelamento celular dependente de estímulos. A desregulação da sinalização PRKD2/PKD2 tem sido associada à proliferação aberrante, à sinalização inflamatória e a características metastáticas na biologia do câncer, além de papéis mais amplos em processos relacionados a estresse e imunidade. A edição gênica de Prkd2 em modelos murinos sustenta estudos mecanísticos da função do domínio quinase, do crosstalk entre vias e de fenótipos dependentes de fosforilação, usando proteômica, imageamento de células vivas e paradigmas in vivo relevantes para doenças.

As Partículas de Ativação Lentivirais PKD2 (m2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Prkd2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais PKD2 (m2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Prkd2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de PKD2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Prkd2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.