Partículas Lentivirales de Activación (m) PKC lambda/iota: sc-422263-LAC
- Especies Diana: mouse
- 200 µl de Partículas Lentivirales de Activación CRISPR/dCas listas para usar
- Partículas Lentivirales de Acitvación (m) PKC lambda/iota es un sistema de activación de la trascripción por mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen determinado a través de la tranducción lentiviral de las células
- Partículas Lentivirales de Acitvación (m) PKC lambda/iota incluyen los siguientes elementos activadores SAM: plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada, (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y un plásmido que codifica la secuencia de diana específica de 20 nt de ARN. También contienen genes de resistencia a blasticidina, higromicina y puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación génica
- Los gRNA codificados por el PKC lambda/iota Plásmido de activación lentiviral (m) y el PKC lambda/iota Plásmido de activación lentiviral (m2) se dirigen a regiones reguladoras distintas del promotor Prkci. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia de la activación génica puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PKC lambda/iota Anticuerpo (E-7): sc-376344
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Partículas Lentivirales de Activación (m) PKC lambda/iota | sc-422263-LAC | 200 µl | $455.00 |
El gen Prkci de ratón codifica la proteína quinasa C atípica lambda/iota (PKCλ/ι), una quinasa de serina/treonina que actúa como componente central del complejo de polaridad PAR para establecer la polaridad apical–basal y coordinar la división celular asimétrica. PKCλ/ι integra señales reguladas por PI3K y por pequeñas GTPasas para controlar la organización del citoesqueleto, el tráfico vesicular y el ensamblaje de las uniones estrechas, modelando así la arquitectura epitelial y la función de barrera. Mediante un control dependiente de la fosforilación de programas transcripcionales y reguladores del ciclo celular, Prkci influye en la proliferación, la diferenciación y la supervivencia de manera dependiente del contexto. La desregulación de la polaridad y de la señalización de PKC atípica se ha vinculado con alteraciones de la homeostasis tisular y fenotipos oncogénicos, lo que convierte a Prkci en un nodo útil para estudiar mecanismos de transformación, invasión y defectos del desarrollo en modelos murinos.
Las partículas de activación lentiviral PKC lambda/iota (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Prkci en una gama más amplia de tipos de células humanas.
Las partículas de activación lentiviral PKC lambda/iota (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Prkci, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PKC lambda/iota. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Prkci y la arquitectura reguladora.
El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.