PIRTCRISPR激活质粒(h): sc-416125-ACT

人类 PIRT（phosphoinositide-interacting regulator of TRP channels，TRP 通道的磷脂酰肌醇相互作用调控因子）编码一种小型膜相关蛋白，可与磷脂酰肌醇 4,5-二磷酸（PIP2）结合，并调节特定瞬时受体电位（TRP）离子通道的活性。通过调控 TRP 依赖性的钙离子及其他阳离子通量，PIRT 参与痛觉、温度感觉与瘙痒等感觉信号传导过程，将膜磷脂酰肌醇动态变化与神经元兴奋性联系起来。PIRT 相关信号与调控 GPCR 及脂质介导的通道门控通路发生交叉，影响下游第二信使反应及活动依赖性的转录程序。TRP 通道调控与磷脂酰肌醇信号异常已被认为与疼痛和神经炎症表型相关，因此 PIRT 是研究感觉神经元生物学及相关疾病模型机制的一个有价值的关键节点。

PIRT CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PIRT的表达。

PIRT CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PIRT基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PIRT转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性PIRT表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PIRT位点，并能够研究内源性位点上依赖于PIRT的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PIRT表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PIRT通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。