PILR-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407310

概要

PILRA（paired immunoglobulin-like type 2 receptor alpha）は、骨髄系細胞集団で高発現する抑制性の細胞表面受容体をコードしており、シアル化O-結合型糖鎖リガンドを認識し、ITIM依存的にSHP-1/2などのホスファターゼをリクルートすることで抑制性シグナルを伝達します。Fc受容体およびTLR関連の活性化プログラムを抑えることにより、PILR-αは自然免疫の活性化閾値、サイトカイン産生量、白血球のエフェクター機能の制御に寄与します。このチェックポイント様の活性は、PILR-αを炎症恒常性、抗原提示細胞の活性化、免疫回避機構を司る経路と結び付けます。PILRAの発現変化やリガンド結合の変動は、神経炎症や感染症の生物学に関与することが示唆されており、複雑な組織微小環境における骨髄系細胞の制御を研究する上で重要な標的となります。

PILR-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPILRA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PILRA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PILRAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PILR-αタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PILR-αシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PILRA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PILR-αの機能に不可欠なPILRAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PILRAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PILR-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPILR-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PILRA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PILR-α HDRプラスミド（h）および PILR-α HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPILRAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPILRA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。