PIK3IP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402814-ACT

PIK3IP1 (proteína 1 que interage com a fosfoinositídeo-3-quinase) é um regulador transmembranar que modula negativamente a atividade da PI3K de classe I por meio da interação com a subunidade catalítica p110, restringindo assim a sinalização a jusante AKT–mTOR. Ao ajustar a saída da via de PI3K, a PIK3IP1 influencia programas de crescimento celular, sobrevivência, metabolismo e sinalização imune, e pode moldar respostas a citocinas e à estimulação de receptores de antígeno. Alterações na expressão de PIK3IP1 têm sido associadas à atividade desregulada da via PI3K/AKT observada em contextos inflamatórios e em redes de sinalização associadas ao câncer, tornando-a relevante para estudos de feedback da via e atenuação de sinais. Como um “freio” endógeno da sinalização de PI3K, a PIK3IP1 oferece um ponto útil para dissecar como reguladores associados à membrana controlam sinais proliferativos e de sobrevivência.

PIK3IP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIK3IP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PIK3IP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIK3IP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIK3IP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PIK3IP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIK3IP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PIK3IP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PIK3IP1 em células tumorais com expressão de PIK3IP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.