Plasmide Double Nickase (h) pICln: sc-405798-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) pICln correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide pICln Double Nickase (h) et le plasmide pICln Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CLNS1A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: pICln Antibody (G-1): sc-271327
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) pICln | sc-405798-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) pICln | sc-405798-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CLNS1A code pICln, une protéine conservée de liaison à l’ARN qui agit comme chaperon d’assemblage des ribonucléoprotéines de classe Sm, soutenant la biogenèse des snRNP du spliceosome et d’autres complexes RNP. Grâce à des interactions avec les composants du méthylosome contenant PRMT5 et avec les protéines Sm, pICln contribue à coordonner la méthylation des arginines et l’assemblage ordonné des RNP, ce qui la relie au contrôle de l’épissage de l’ARN et, plus largement, à la régulation de l’expression génique. Une altération de la fonction de CLNS1A/pICln a été associée à des défauts de maturation des snRNP, à une dérégulation du transcriptome et à des phénotypes de stress cellulaire pertinents pour des études mécanistiques des processus pathologiques liés à l’épissage.
pICln Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CLNS1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CLNS1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CLNS1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CLNS1A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.