PICK1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403683-ACT

ヒトPICK1（protein interacting with C kinase 1）は、PDZドメインとBARドメインを有する足場タンパク質であり、膜の曲率を感知する機能を受容体のトラフィッキングやシグナル伝達に結び付けます。PICK1は、AMPA型グルタミン酸受容体や各種トランスポーターを含む多様な膜タンパク質のエンドサイトーシス、リサイクリング、シナプス局在を制御し、シナプス可塑性および細胞内キナーゼシグナルに影響を与えます。さらに、小胞輸送や細胞骨格の組織化における役割を通じて、PICK1は神経細胞間コミュニケーションや、複数の細胞種における極性輸送プロセスに関与します。PICK1に関連する経路の制御破綻は、神経機能障害や受容体恒常性の変化との関連で研究されており、膜近傍のシグナル伝達ネットワークを解析する上で有用な結節点となります。

PICK1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PICK1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PICK1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PICK1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPICK1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PICK1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPICK1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPICK1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPICK1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPICK1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。