Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
PI 3-kinase p85β Double Nickaseプラスミド (h): sc-401991-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PI 3-kinase p85β Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- PI 3-kinase p85βダブルニカースプラスミド（h）およびPI 3-kinase p85βダブルニカースプラスミド（h2）は、PIK3R2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: PI 3-kinase p85β 抗体 (H-1): sc-515646
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PI 3-kinase p85β Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401991-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PI 3-kinase p85β Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401991-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PIK3R2は、クラスIAホスホイノシチド3-キナーゼ（PI3K）のp85β制御サブユニットをコードしており、p110触媒サブユニットの各アイソフォームを安定化・調節するとともに、活性化された受容体型チロシンキナーゼやアダプタータンパク質を下流のPI3K–AKT–mTORシグナル伝達へと結び付けます。PIP3産生の制御を介して、PI 3-キナーゼp85βは細胞の増殖・生存・代謝、細胞骨格ダイナミクス、ならびに小胞輸送に影響を与え、インスリン/IGFや各種増殖因子経路からのシグナルを統合します。PI3K経路の制御異常は、がん化シグナル、代謝異常、免疫細胞機能に広く関与するとされており、PIK3R2は経路の配線やフィードバックを解明するうえで重要なノードとなります。研究用途では、PIK3R2を摂動させることで、PI3Kアイソフォームの使い分け、シグナル強度の調節/終結、MAPKやmTOR複合体との経路クロストークに関する機構解析を支援します。
PI 3-kinase p85β ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PIK3R2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PIK3R2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PIK3R2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PIK3R2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。