PI 3-kinase p85β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401991

Übersicht

PIK3R2 kodiert die regulatorische Untereinheit p85β der Phosphoinositid-3-Kinase (PI3K) der Klasse IA, die die katalytischen p110-Untereinheiten stabilisiert und moduliert und aktivierte Rezeptor-Tyrosinkinasen sowie Adapterproteine mit der PI3K-Signalübertragung verknüpft. Über die Kontrolle der PIP3-Produktion steuert PI3-Kinase p85β den AKT–mTOR-Signalweg und verwandte Signalwege, die Zellwachstum, Stoffwechsel, Überleben und die Dynamik des Zytoskeletts regulieren. Störungen der Regulation des PI3K-Signalwegs sind breit mit onkogenen Signalprozessen, Insulin/IGF-Antworten und der Funktion von Immunzellen verbunden. Da p85β sowohl die basale als auch die reizabhängige PI3K-Aktivität beeinflusst, wird es häufig im Kontext von Signaling-Feedback, Crosstalk zwischen Signalwegen und der Umverdrahtung von Signalnetzwerken untersucht.

Das PI 3-kinase p85β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PIK3R2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PIK3R2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PIK3R2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PI 3-kinase p85β-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PIK3R2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PI 3-kinase p85β-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PIK3R2-Exone abzielen, die für die PI 3-kinase p85β-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PIK3R2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PI 3-kinase p85β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PI 3-kinase p85β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PIK3R2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PI 3-kinase p85β HDR-Plasmid (h) und PI 3-kinase p85β HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PIK3R2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PIK3R2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.