Plásmido CRISPR de Activación (h) PI 3-kinase C2β: sc-402519-ACT

PIK3C2B codifica la fosfatidilinositol-4-fosfato 3-quinasa C2β (PI3K-C2β), una quinasa lipídica de clase II que genera señales de fosfoinosítidos importantes para la dinámica de membrana y el tráfico intracelular. Mediante la regulación de los depósitos de fosfatidilinositol 3-fosfato y fosfatidilinositol (3,4)-bisfosfato, PI3K-C2β influye en la endocitosis, el transporte vesicular, la remodelación del citoesqueleto y salidas de señalización relacionadas con PI3K/AKT dependientes del contexto. La expresión o actividad alteradas de PIK3C2B se han asociado con una señalización de factores de crecimiento desregulada y fenotipos invasivos en múltiples modelos experimentales de cáncer, y se estudia en vías vinculadas al metabolismo y a las respuestas celulares al estrés. Estas características hacen de PIK3C2B un objetivo útil para desentrañar el control, impulsado por fosfoinosítidos, de la señalización y de los procesos asociados a la membrana en células humanas.

PI 3-kinase C2β El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PIK3C2B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PI 3-kinase C2β El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PIK3C2B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PIK3C2B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PI 3-kinase C2β. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PIK3C2B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PI 3-kinase C2β en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PI 3-kinase C2β en células tumorales con expresión de PIK3C2B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.