PHLPPL Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-434083-ACT

O gene **Phlpp2** de camundongo codifica a **PHLPPL**, uma fosfatase de Ser/Thr da família **PP2C** que atenua a sinalização por fatores de crescimento ao desfosforilar quinases **AGC**, sobretudo a **AKT** em **Ser473**, restringindo assim a amplitude da via **PI3K–AKT** e os programas metabólicos e de sobrevivência a jusante ligados ao **mTOR**. Por meio da regulação negativa da fosforilação de quinases, a PHLPPL ajuda a moldar decisões celulares envolvendo proliferação, apoptose e respostas ao estresse, e pode influenciar o controle por feedback em redes de sinalização de receptores tirosina-quinase. Alterações na atividade de **PHLPP/PHLPPL** têm sido associadas na literatura a uma homeostase de sinalização desregulada relevante para transformação oncogênica, metabolismo de insulina/energia e fenótipos relacionados à inflamação, tornando **Phlpp2** um nó útil para estudos mecanísticos de amortecimento de vias. Como fosfatase que contrabalança cascatas impulsionadas por quinases, a PHLPPL também é relevante para dissecar efeitos da duração do sinal e mecanismos de resistência adaptativa em modelos celulares.

PHLPPL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Phlpp2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PHLPPL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Phlpp2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Phlpp2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PHLPPL. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Phlpp2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PHLPPL no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PHLPPL em células tumorais com expressão de Phlpp2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.