PH-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409966

概要

P4HTMは、プロリル4-ヒドロキシラーゼ膜貫通タンパク質（PH-4）をコードしており、これは小胞体に関連するジオキシゲナーゼとして、特定の基質におけるプロリンの水酸化反応を触媒します。これにより、酸素および代謝補因子の利用可能性が、翻訳後タンパク質修飾と結び付けられます。プロリル4-ヒドロキシラーゼファミリーの一員として、PH-4は分泌経路におけるタンパク質の折り畳み、安定性、品質管理プロセスに影響し得る位置づけにあり、その下流では細胞ストレス応答やプロテオスタシスに影響を及ぼします。P4HTMの活性は酸素感知の生物学および低酸素応答性シグナルの制御と関連付けられており、低酸素状態への細胞適応を形作る経路と統合的に機能します。遺伝学的および機能的研究により、P4HTMは神経発達や代謝恒常性に関わる疾患関連表現型に関与することが示唆されており、ヒト細胞系における機構解析の標的となっています。

PH-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるP4HTM遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、P4HTM内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、P4HTMのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PH-4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PH-4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、P4HTM欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PH-4の機能に不可欠なP4HTMエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、P4HTMゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PH-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPH-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、P4HTM遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PH-4 HDRプラスミド（h）および PH-4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはP4HTMホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のP4HTM標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。