PGF2αR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402974-ACT

PTGFR codifica o receptor de prostaglandina F2α (PGF2αR), um GPCR do tipo rodopsina que se liga à PGF2α para iniciar a sinalização dependente de Gq/11, elevando o cálcio intracelular e ativando a fosfolipase C, a PKC e vias MAPK a jusante. Por meio dessas cascatas, o PGF2αR regula a contratilidade do músculo liso, o tônus vascular e respostas inflamatórias dependentes do contexto, conectando a biologia dos prostanoides a programas de remodelação tecidual. Alterações na sinalização de PTGFR têm sido estudadas na fisiologia reprodutiva, na regulação da pressão ocular e em pistas do microambiente associadas ao câncer, nas quais a sinalização dirigida por prostaglandinas pode influenciar a proliferação, a migração e a dinâmica da matriz extracelular. Como receptor de membrana que integra sinais de eicosanoides, o PGF2αR serve como um ponto acessível para investigar desfechos transcricionais e fenotípicos mediados por GPCR.

PGF2αR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTGFR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PGF2αR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTGFR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTGFR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PGF2αR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTGFR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PGF2αR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PGF2αR em células tumorais com expressão de PTGFR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.