PGE synthase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402085

概要

PTGESはプロスタグランジンE合成酵素をコードしており、アラキドン酸カスケードにおける重要な終末酵素として、COX由来のプロスタグランジンH2をプロスタグランジンE2（PGE2）へと変換する。PGE2量を制御することで、PTGESはEP受容体経路および下流のcAMP/PKAシグナルを介して、炎症性シグナル、疼痛感作、発熱反応、ならびに免疫細胞機能の調節に寄与する。PTGESの活性はサイトカイン駆動性プログラム（例：NF-κBに連動した誘導）とも交差し、血管緊張の調節や上皮バリア応答などの過程に影響を及ぼす。PGE2生合成の破綻やPTGES発現の異常は、慢性炎症や腫瘍随伴性の微小環境シグナルと関連づけられており、炎症関連の病態生理の機序研究における重要性を支持している。

PGE synthase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPTGES遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PTGES内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PTGESのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PGE synthaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PGE synthaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PTGES欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PGE synthaseの機能に不可欠なPTGESエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PTGESゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PGE synthase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPGE synthase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PTGES遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PGE synthase HDRプラスミド（h）および PGE synthase HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPTGESホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPTGES標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。