PGC1a Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400070-ACT

PPARGC1A codifica o coativador transcricional PGC1a, um regulador central da biogênese mitocondrial e do metabolismo oxidativo em células humanas. O PGC1a integra sinais de vias de detecção de energia e de resposta ao estresse, incluindo AMPK e sinalização dependente de sirtuínas, para coordenar programas transcricionais que controlam a oxidação de ácidos graxos, a fosforilação oxidativa e as defesas antioxidantes, por meio de parceiros como PPARs, ERRs e NRF1/2. Alterações na atividade de PPARGC1A/PGC1a têm sido associadas à desregulação metabólica e ao comprometimento da bioenergética celular, sendo frequentemente estudadas em contextos como resistência à insulina, obesidade, neurodegeneração e energetics de cardiomiócitos. Como um nó que conecta a disponibilidade de nutrientes ao controle transcricional, o PGC1a é amplamente utilizado para investigar a função mitocondrial, a homeostase redox e respostas adaptativas ao estresse fisiológico.

PGC1a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PPARGC1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PGC1a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PPARGC1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PPARGC1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PGC1a. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PPARGC1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PGC1a no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PGC1a em células tumorais com expressão de PPARGC1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.