Pericentrin 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401822-ACT

PCNT codifica a pericentrina 2, um componente estrutural central do material pericentriolar, essencial para a maturação do centrossomo e para a nucleação de microtúbulos. Ao organizar complexos em anel de γ-tubulina e ancorar proteínas reguladoras como AURKA e PLK1, a pericentrina 2 sustenta a montagem do fuso mitótico, a segregação cromossômica e a ciliogênese. A desorganização da arquitetura centrossomal dependente de PCNT perturba o controle do ciclo celular e a estabilidade genômica, processos frequentemente implicados em distúrbios do desenvolvimento e na aneuploidia associada ao câncer. Como a integridade do centrossomo influencia as saídas de sinalização do cílio primário, PCNT também é relevante para estudos de vias de sinalização ligadas a cílios e de polaridade celular.

Pericentrin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PCNT sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pericentrin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PCNT em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PCNT, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pericentrin 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PCNT nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pericentrin 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pericentrin 2 em células tumorais com expressão de PCNT silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.