Perforin 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400976-ACT

PRF1 codifica a perforina 1, um efetor citolítico formador de poros que é essencial para a morte mediada por grânulos realizada por linfócitos T citotóxicos e células natural killer. Após a formação da sinapse imunológica, a perforina facilita a entrega de granzimas às células-alvo para desencadear programas apoptóticos, integrando-se a vias que controlam a vigilância imunológica, a defesa antiviral e a imunoedição tumoral. A atividade de PRF1 está intimamente ligada ao estado de ativação dos linfócitos e à dinâmica de desgranulação, e alterações na sua expressão ou função associam-se a fenótipos de desregulação imune, incluindo citotoxicidade prejudicada e síndromes hiperinflamatórias. Como componente central da citotoxicidade mediada por células, PRF1 é amplamente estudado em contextos como biologia de infeções, evasão imunitária e lesão tecidual inflamatória.

Perforin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Perforin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Perforin 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Perforin 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Perforin 1 em células tumorais com expressão de PRF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.