Perforin 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400976-ACT

PRF1はパーフォリン1をコードしており、これは細胞膜に孔を形成する細胞傷害性エフェクターで、細胞傷害性Tリンパ球およびナチュラルキラー（NK）細胞による顆粒依存的な殺傷に不可欠です。免疫シナプスが形成されると、パーフォリンはグランザイムを標的細胞内へ送り込むのを助け、アポトーシスプログラムを誘導します。さらに、免疫監視、抗ウイルス防御、腫瘍免疫編集を制御する経路と統合的に機能します。PRF1の活性はリンパ球の活性化状態や脱顆粒の動態と密接に関連しており、その発現や機能の変化は、細胞傷害能の低下や過炎症性症候群などを含む免疫調節異常の表現型と関連します。細胞性免疫による細胞傷害の中核成分として、PRF1は感染生物学、免疫回避、炎症性の組織障害といった文脈で広く研究されています。

Perforin 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PRF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Perforin 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PRF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPRF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Perforin 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPRF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPerforin 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPRF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPerforin 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。