PDZ-RhoGEF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403444-ACT

ARHGEF11 は PDZ-RhoGEF をコードする遺伝子であり、活性化された Gα12/13 シグナル伝達を RhoA の活性化および下流の細胞骨格リモデリングへと結びつける、RhoA 特異的なグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）である。PDZ-RhoGEF は RhoA–ROCK 経路の出力を促進することで、アクチン・ストレスファイバー形成、接着斑（フォーカルアドヒージョン）の動態、細胞極性、収縮性を制御し、細胞移動や細胞間接着の組織化などの過程に影響を及ぼす。ARHGEF11 に関連するシグナルは、組織構築や炎症応答を形作る GPCR ネットワークおよびメカノトランスダクション経路とも交差する。PDZ-RhoGEF が関与する Rho GTPase シグナルの制御異常は、がん生物学における運動能や浸潤性の変化、ならびに遺伝学的・機能的研究における血管系および代謝系の表現型と関連づけられている。

PDZ-RhoGEF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARHGEF11の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PDZ-RhoGEF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ARHGEF11 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はARHGEF11転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PDZ-RhoGEFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のARHGEF11遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPDZ-RhoGEF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびARHGEF11発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPDZ-RhoGEF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。