PDGF-C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401977-ACT

O PDGFC codifica o fator de crescimento derivado de plaquetas C (PDGF-C), um fator de crescimento secretado que é ativado proteoliticamente e sinaliza principalmente por meio de complexos receptores contendo PDGFRα, para regular a proliferação e a migração de células mesenquimais e o remodelamento da matriz extracelular. O PDGF-C contribui para programas angiogênicos e estromais ao acionar vias de receptor tirosina-quinase, incluindo PI3K–AKT e RAS–MAPK, influenciando a ativação de fibroblastos e o comportamento de células perivasculares. Em tecidos humanos, a expressão desregulada de PDGFC tem sido associada a remodelamento fibrótico e a padrões vasculares aberrantes, sendo frequentemente estudada no contexto de interações tumor–estroma e de crescimento invasivo. Esses papéis tornam o PDGFC um componente relevante para dissecar mecanismos de sinalização parácrina no desenvolvimento, no reparo de feridas e em modelos de doença impulsionados pelo microambiente.

PDGF-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PDGFC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PDGF-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PDGFC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PDGFC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PDGF-C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PDGFC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PDGF-C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PDGF-C em células tumorais com expressão de PDGFC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.