PDGF-B Plasmídeo de ativação de CRISPR (r): sc-437277-ACT

O fator de crescimento derivado de plaquetas, subunidade B (PDGF-B), é um mitógeno secretado que sinaliza principalmente por meio do PDGFRβ para regular o recrutamento, a proliferação e a migração de pericitos e células musculares lisas vasculares durante a angiogênese e a remodelação tecidual. A sinalização PDGF-B–PDGFR ativa as vias MAPK/ERK, PI3K/AKT e PLCγ, coordenando a deposição de matriz extracelular, a quimiotaxia e programas de reparo de feridas. Em modelos de rato, alterações na atividade de PDGF-B são comumente associadas à disfunção vascular, à remodelação fibrótica e à ativação estromal aberrante, tornando-o um alvo útil para estudar a integridade neurovascular e a remodelação específica de órgãos. A desregulação da sinalização de PDGF-B também é relevante em microambientes proliferativos e inflamatórios, nos quais interações mesenquimais–endoteliais moldam a arquitetura tecidual associada a doenças.

PDGF-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (r) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PDGF-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (r) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição , onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PDGF-B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PDGF-B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PDGF-B em células tumorais com expressão de silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.