PDGF-A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400711-ACT

PDGFA codifica o fator de crescimento derivado de plaquetas A (PDGF-A), um ligante dimérico secretado que sinaliza principalmente por meio do PDGFRα para regular a proliferação, a sobrevivência e a migração dirigida de células mesenquimais. O PDGF-A contribui para a morfogênese do desenvolvimento e para o remodelamento tecidual ao ativar cascatas de sinalização de receptores tirosina-quinase, como as vias RAS–MAPK, PI3K–AKT e dependentes de PLCγ. Em tecidos adultos, a desregulação da sinalização PDGF-A/PDGFR está associada à ativação estromal aberrante, à expansão de fibroblastos e ao remodelamento da matriz extracelular, influenciando a inflamação e as interações tumor–estroma. Assim, a expressão de PDGFA é frequentemente investigada em contextos que envolvem programas angiogênicos e fibróticos, reparo de feridas e alterações no estado celular induzidas por fatores de crescimento.

PDGF-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PDGFA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PDGF-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PDGFA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PDGFA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PDGF-A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PDGFA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PDGF-A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PDGF-A em células tumorais com expressão de PDGFA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.