PDE5A Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401627-NIC

PDE5A codifica a fosfodiesterase 5A, uma fosfodiesterase específica de cGMP que encerra a sinalização óxido nítrico–cGMP ao hidrolisar o GMP cíclico (cGMP) em GMP. Ao controlar os níveis de cGMP, a PDE5A regula a atividade da proteína quinase G (PKG) e processos a jusante, incluindo o tônus do músculo liso, a reatividade vascular, a função plaquetária e respostas de remodelamento cardíaco. A atividade da PDE5A está ligada a redes de sinalização que integram a produção de guanilato ciclase com o manejo de cálcio e a dinâmica do citoesqueleto, influenciando a contratilidade e a proliferação celulares. A desregulação da expressão da PDE5A ou do equilíbrio de sinalização tem sido investigada na fisiopatologia cardiovascular e vascular pulmonar, no remodelamento associado à fibrose e em outros contextos em que a homeostase alterada de cGMP contribui para fenótipos relacionados à doença.

PDE5A O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PDE5A em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PDE5A. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PDE5A. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PDE5A interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.