PCM1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401360-ACT

O PCM1 humano codifica o pericentriolar material 1, uma proteína de andaime associada ao centrossomo e aos satélites centriolares, que organiza a matriz pericentriolar e sustenta a integridade do centrossomo. O PCM1 ajuda a recrutar e ancorar componentes centrossomais, como fatores do complexo em anel da γ-tubulina e proteínas de satélite, conectando a nucleação de microtúbulos, a maturação do centrossomo e a progressão do ciclo celular. Por meio dessas funções, influencia a ciliogênese e a organização do citoesqueleto, processos centrais para a fidelidade mitótica e o tráfego intracelular. A desregulação do PCM1 e rearranjos envolvendo o PCM1 têm sido relatados em contextos de câncer e neurodesenvolvimento, tornando-o um nó relevante para estudar a estabilidade genômica associada ao centrossomo e fenótipos de sinalização.

PCM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PCM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PCM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PCM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PCM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PCM1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PCM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PCM1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PCM1 em células tumorais com expressão de PCM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.