PCLAF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402724-ACT

PCLAF（PCNA clamp associated factor、別名KIAA0101）はPCNA結合タンパク質であり、プロセッシブなDNA合成の制御や、停止した複製フォークにおける修復因子のリクルートを調節することで、DNA複製と修復を協調させます。細胞周期進行、とくにS期に関与し、複製ストレス応答や複製後DNA損傷耐性に関連する経路を介してゲノム安定性にも影響します。PCLAFの発現異常は、複数のがん関連状況において増殖性表現型やチェックポイント制御の破綻と関連づけられており、複製に結びついたクロマチンダイナミクスを研究するうえで有用な結節点となります。研究者はPCLAFを、PCNA依存性シグナル伝達、DNA損傷応答ネットワーク、そして急速な細胞分裂を支える転写プログラムを結び付けて理解するために、しばしば解析対象としています。

PCLAF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PCLAFの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PCLAF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PCLAF 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPCLAF転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PCLAFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPCLAF遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPCLAF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPCLAF発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPCLAF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。