PCIF1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-407384-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PCIF1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase PCIF1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase PCIF1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para PCIF1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PCIF1 Anticorpo (A-9): sc-374406
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PCIF1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-407384-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PCIF1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-407384-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PCIF1 (fator 1 de interação com o CTD fosforilado) é uma metiltransferase associada à tampa (cap) do mRNA que catalisa a N6-metilação da 2′-O-metiladenosina no primeiro nucleotídeo transcrito (m6Am), adjacente à tampa m7G, moldando as paisagens de modificações de RNA próximas ao cap. Por meio dessa atividade, o PCIF1 influencia a estabilidade do mRNA, a eficiência de tradução e programas de expressão gênica específicos de transcritos que se cruzam com o processamento de RNA e a regulação epitranscritômica. O m6Am dependente de PCIF1 tem sido associado à modulação de respostas celulares ao estresse e de saídas de sinalização do desenvolvimento e da proliferação via controle pós-transcricional. A desregulação da metilação próxima ao cap e da expressão de PCIF1 tem sido investigada em contextos que incluem a biologia tumoral e a expressão gênica relacionada ao sistema imune, sustentando sua relevância para estudos mecanísticos de fenótipos impulsionados por modificações de RNA.
PCIF1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PCIF1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PCIF1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PCIF1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PCIF1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.