PBEF CRISPR Activationプラスミド (m): sc-425569-ACT

マウスのNamptはPBEF（visfatinとしても知られる）をコードしており、ニコチンアミドをニコチンアミドモノヌクレオチドへ変換するNAD⁺サルベージ経路の律速酵素として、細胞のエネルギー代謝とレドックス恒常性を支えます。NAD⁺の利用可能量を制御することで、PBEFはサーチュインおよびPARP依存性シグナル伝達、ミトコンドリア機能、DNA修復能、ならびにストレス応答に影響を与えます。Nampt/PBEF活性は、免疫代謝制御、炎症シグナル、細胞生存プログラムと密接に関連し、代謝異常や腫瘍関連の代謝適応における応答を形作ります。Namptが関与するNAD⁺代謝の破綻は、インスリン抵抗性、神経変性に関連する生体エネルギー・ストレス、そしてNAD⁺需要が高まる増殖性疾患モデルなど、さまざまな状況で研究されています。

PBEF CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Namptの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PBEF CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Nampt 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNampt転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PBEFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNampt遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPBEF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNampt発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPBEF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。