paxillin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-416733

概要

PXNはパキシリン（paxillin）をコードしており、パキシリンは焦点接着に局在するアダプタータンパク質として、インテグリンシグナル伝達とアクチン細胞骨格の再構築を協調させ、細胞の接着、伸展、移動を制御します。パキシリンはFAKやSRCを含むキナーゼおよび構造タンパク質の足場として機能し、細胞外マトリックスからの刺激をMAPK/ERKやPI3Kシグナル伝達などの下流経路へと結び付けます。さらに、焦点接着のターンオーバーやメカノトランスダクションの調節を通じて、創傷修復、免疫細胞のトラフィッキング、細胞外マトリックスに駆動される細胞応答といったプロセスに寄与します。パキシリンのシグナル伝達異常や焦点接着ダイナミクスの破綻は、がん生物学や線維化・炎症性微小環境に関連する細胞運動性や浸潤表現型の変化という観点から、しばしば研究対象となります。

paxillin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPXN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PXN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PXNのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、paxillinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、paxillinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PXN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• paxillinの機能に不可欠なPXNエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PXNゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• paxillin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびpaxillin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PXN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  paxillin HDRプラスミド（h）および paxillin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPXNホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPXN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。