Pax-8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401757

概要

PAX8は、系譜の特異化や器官形成を制御するpaired box型転写因子Pax-8をコードしており、甲状腺の濾胞発生や、腎臓およびミュラー管系における上皮分化で重要な役割を担います。Pax-8は配列特異的なDNAモチーフに結合して、細胞の同一性・増殖・生存を制御する転写プログラムを統合的に調節し、他の転写調節因子とも協調してクロマチン構造や遺伝子発現ネットワークを形成します。成人組織では、PAX8は分化状態の維持に寄与し、発現異常や遺伝子再構成は複数の上皮性悪性腫瘍における転写制御の変化と関連づけられているため、腫瘍の原発巣推定研究で頻用されるマーカーでもあります。これらの機能により、PAX8は発生に関わる遺伝子制御回路、上皮の可塑性、ならびにヒト細胞モデルにおける系譜追跡シグネチャーを検討する上で有用な標的（ノード）となります。

Pax-8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPAX8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PAX8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PAX8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Pax-8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Pax-8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PAX8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Pax-8の機能に不可欠なPAX8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PAX8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Pax-8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPax-8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PAX8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Pax-8 HDRプラスミド（h）および Pax-8 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPAX8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPAX8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。