Parkin Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-424514-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ParkinO plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Parkin (m) e o Plasmídeo Double Nickase Parkin (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Park2. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Parkin Anticorpo (PRK8): sc-32282
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Parkin Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-424514-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse Park2 codifica a ligase E3 de ubiquitina Parkin, um regulador central do controle de qualidade mitocondrial que colabora com a PINK1 para marcar mitocôndrias danificadas para mitofagia dependente de ubiquitina. A ubiquitinação mediada por Parkin de proteínas da membrana mitocondrial externa modula a degradação pelo proteassoma, a dinâmica mitocondrial e a sinalização responsiva ao estresse que influencia a homeostase bioenergética. Por meio dessas funções, Park2 é amplamente utilizado para estudar vias que conectam estresse oxidativo, disfunção mitocondrial e proteostase em sistemas neuronais e não neuronais. A desregulação da atividade de Parkin está fortemente associada a mecanismos relevantes para a neurodegeneração, particularmente processos implicados em fenótipos parkinsonianos.
Parkin O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Park2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Park2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Park2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Park2 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.