PADI4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422177-ACT

O gene Padi4 do camundongo codifica a peptidil arginina deiminase 4 (PADI4), uma enzima dependente de Ca2+ que citrulina resíduos de arginina em proteínas para modular a carga proteica, a organização da cromatina e programas de transcrição. A PADI4 é enriquecida em linhagens mieloides e está ligada à citrulinação de histonas durante a formação de armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs), influenciando a sinalização imune inata e respostas inflamatórias. Por meio da regulação de estados epigenéticos e da modificação pós-traducional de substratos nucleares e do citoesqueleto, a PADI4 afeta vias que controlam a diferenciação celular e respostas ao estresse. A citrulinação desregulada está associada à autoimunidade e a patologias inflamatórias, tornando o Padi4 um alvo útil para estudar mecanismos de doenças mediadas pelo sistema imune e redes de modificação de proteínas.

PADI4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Padi4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PADI4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Padi4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Padi4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PADI4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Padi4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PADI4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PADI4 em células tumorais com expressão de Padi4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.