PADI2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403349-ACT

A peptidil arginina desiminase 2 (PADI2) é uma enzima dependente de cálcio que catalisa a citrulinação de resíduos de arginina em proteínas, alterando a carga, a estrutura e as redes de interação proteica. Essa modificação pós-traducional regula a acessibilidade da cromatina e a expressão gênica por meio da citrulinação de histonas e pode remodelar proteínas do citoesqueleto e associadas à mielina, vinculando a PADI2 à diferenciação e à sinalização inflamatória. A atividade da PADI2 se cruza com programas transcricionais influenciados por vias acionadas por citocinas e tem sido estudada em contextos de regulação epigenética aberrante, lesão tecidual mediada pelo sistema imune e fenótipos associados a tumores. A citrulinação desregulada e a geração de neoepítopos implicam a PADI2 em mecanismos relevantes para a autoimunidade e a biologia do câncer, sustentando seu uso como um nó molecular para investigação de vias.

PADI2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PADI2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PADI2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PADI2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PADI2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PADI2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PADI2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PADI2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PADI2 em células tumorais com expressão de PADI2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.