Plasmide CRISPR/Cas9 KO PACAP (m): sc-419000

Présentation

Adcyap1 code le polypeptide activateur de l’adénylate cyclase hypophysaire (PACAP), un neuropeptide conservé qui signale principalement via PAC1 (ADCYAP1R1) et d’autres RCPG (récepteurs couplés aux protéines G) apparentés de classe B, afin de réguler les voies cAMP/PKA, MAPK/ERK et le Ca²⁺ intracellulaire. Dans les tissus murins, le PACAP module la neurotransmission, le neurodéveloppement, la sécrétion neuroendocrine et les réponses cellulaires au stress, influençant la plasticité synaptique, l’homéostasie circadienne et hypothalamique, ainsi que la régulation autonome. La signalisation du PACAP s’entrecroise avec des programmes inflammatoires et métaboliques en modulant la libération de cytokines et les voies de signalisation de survie cellulaire dans des compartiments neuronaux et périphériques. Une dérégulation de l’axe ADCYAP1/PACAP a été associée dans la littérature à la neurobiologie liée au stress, au traitement de la douleur et à des mécanismes neuro-inflammatoires, étayant des études mécanistiques dans des contextes pertinents pour le système nerveux et l’immunité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PACAP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adcyap1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adcyap1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adcyap1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PACAP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adcyap1 pour l'étude de la signalisation de PACAP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adcyap1 essentiels à la fonction de PACAP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adcyap1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PACAP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PACAP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adcyap1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PACAP plasmide HDR (m) et le PACAP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adcyap1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adcyap1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.