PA28β Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403643-ACT

PSME2 codifica a PA28β, uma subunidade central do complexo ativador do proteassoma PA28 (11S), que se liga ao proteassoma 20S e promove o processamento de peptídeos independente de ubiquitina. Ao acelerar a renovação proteassomal e moldar os repertórios de peptídeos, a PA28β contribui para o processamento de antígenos e a apresentação por MHC de classe I, conectando a proteostase à vigilância imunológica. Essa atividade se cruza com vias responsivas a interferon, com o manejo do estresse oxidativo e com a regulação do controle de qualidade de proteínas no citosol e no núcleo. A ativação desregulada do proteassoma e a apresentação de antígenos têm sido associadas a estados de sinalização inflamatória e à imunobiologia tumoral, tornando PSME2 um alvo útil para estudos mecanísticos nesses contextos.

PA28β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PSME2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PA28β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PSME2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PSME2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PA28β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PSME2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PA28β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PA28β em células tumorais com expressão de PSME2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.