P2Y2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422096-ACT

O gene **P2ry2** do camundongo codifica o recetor purinérgico **P2Y2** (P2Y2R), um recetor acoplado à proteína G ativado por ATP e UTP extracelulares, que se acopla principalmente a **Gq/11** para estimular a **fosfolipase C**, a mobilização de **Ca2+** intracelular e a sinalização dependente de **PKC**. O P2Y2 também ativa vias relacionadas a **MAPK/ERK** e **PI3K** e pode modular a remodelação do citoesqueleto e a migração ligada a integrinas, sustentando funções no transporte epitelial, em respostas mecanossensoriais e no tráfego de leucócitos. Em tecidos imunes e de barreira, a sinalização de P2Y2 contribui para a produção de quimiocinas e para respostas de stress adjacentes ao inflamassoma, impulsionadas por nucleótidos libertados durante lesão tecidual. A desregulação da sinalização purinérgica envolvendo P2Y2 tem sido estudada em doença pulmonar inflamatória, remodelação crónica das vias aéreas, dor e neuroinflamação, e sinalização do microambiente associada a tumores, tornando **P2ry2** um alvo útil para investigar vias e fenótipos em modelos murinos.

P2Y2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de P2ry2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

P2Y2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus P2ry2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição P2ry2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de P2Y2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus P2ry2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de P2Y2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via P2Y2 em células tumorais com expressão de P2ry2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.