p19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401761

概要

CDKN2Dはp19 INK4Dをコードしており、p19 INK4Dはサイクリン依存性キナーゼ阻害因子（CDK inhibitor）であるINK4ファミリーの一員です。p19 INK4DはCDK4/6の活性を選択的に抑制することで、RB1を低リン酸化状態に保ち、G1/S期の細胞周期進行を制限します。サイクリンD–CDKシグナル伝達を調節することにより、p19 INK4Dはチェックポイント制御、増殖タイミング、ならびに複数の組織環境における細胞分化プログラムに寄与します。この経路の攪乱は、細胞周期への異常な進入やゲノム維持機構の欠陥としばしば関連し、がん生物学およびその他の増殖性疾患に関わる重要な要因となります。そのためCDKN2Dは、CDK4/6–RB軸の制御、老化様状態、ストレス応答性の増殖制御を解析するための重要な解析ノードとして広く用いられています。

p19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCDKN2D遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CDKN2D内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CDKN2Dのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、p19 INK4D/CDKN2Dタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、p19 INK4D/CDKN2Dシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CDKN2D欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• p19 INK4D/CDKN2Dの機能に不可欠なCDKN2Dエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CDKN2Dゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• p19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびp19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CDKN2D遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  p19 INK4D/CDKN2D HDRプラスミド（h）および p19 INK4D/CDKN2D HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCDKN2Dホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCDKN2D標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。