Plásmido CRISPR de Activación (h) p120: sc-400943-ACT

CTNND1 codifica la p120-catenina (p120), una proteína con repeticiones armadillo que se une a la región yuxtamembrana de las cadherinas clásicas y estabiliza las uniones adherentes al limitar la endocitosis y el recambio de cadherinas. Al coordinar los complejos cadherina–catenina con la señalización de las GTPasas de la familia Rho, p120 influye en la dinámica del citoesqueleto de actina, la polaridad epitelial y el control del crecimiento dependiente del contacto, conectándose con vías que regulan la migración celular y la morfogénesis tisular. La expresión alterada de CTNND1 o la localización de p120 se ha asociado con programas de adhesión célula–célula alterados y fenotipos invasivos en modelos de cáncer, y las alteraciones de CTNND1 también se estudian en el contexto de trastornos del desarrollo que afectan la biología craneofacial y epitelial.

p120 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CTNND1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

p120 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CTNND1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CTNND1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de p120. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CTNND1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de p120 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía p120 en células tumorales con expresión de CTNND1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.