OSC CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421475

概要

Lss は、2,3-オキシドスクアレンをラノステロールへと環化し、メバロン酸経路のうちステロール分岐への代謝フラックスを決定づける、小胞体関連の主要酵素であるオキシドスクアレン環化酵素（OSC）をコードする。ステロール生合成の制御を介して、OSC は膜コレステロール組成、リピッドラフトの構造、ならびに下流のステロイド産生能に影響を与える。ステロール代謝の攪乱は、脂質恒常性の破綻や細胞ストレス応答プログラムの異常と広く関連しているため、Lss は生理および疾患関連の状況における代謝リモデリングを研究するうえで有用な結節点となる。マウスモデルでは、Lss/OSC の機能障害は、ステロール経路の制約が細胞増殖・分化・膜脂質組成に依存するシグナル伝達ネットワークにどのような影響を及ぼすかを検討するための扱いやすいアプローチを提供する。

OSC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLss遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Lss内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Lssのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、OSCタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、OSCシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Lss欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• OSCの機能に不可欠なLssエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Lssゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• OSC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびOSC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Lss遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  OSC HDRプラスミド（m）および OSC HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLssホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLss標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。