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OGG1CRISPR激活质粒(m) | sc-422012-ACT | 20 µg | $397.00 |
小鼠 Ogg1 基因编码 8-氧鸟嘌呤 DNA 糖基化酶 1(OGG1),这是碱基切除修复(BER)中的关键酶,能够识别并切除 8-oxoG 等氧化嘌呤,从而防止 G:C 向 T:A 的颠换突变。OGG1 通过在氧化性 DNA 损伤位点启动修复,在细胞暴露于线粒体和细胞核来源的活性氧(ROS)时帮助维持基因组稳定性。OGG1 的活性与氧化应激反应、复制相关的修复过程以及影响细胞衰老和炎症信号的诱变控制通路相互交叉。OGG1 功能或调控的改变常在癌症易感性、神经退行性疾病、代谢功能障碍以及其他与氧化损伤负荷升高相关的疾病模型中被研究。
OGG1 CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Ogg1的表达。
OGG1 CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Ogg1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Ogg1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性OGG1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Ogg1位点,并能够研究内源性位点上依赖于OGG1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Ogg1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟OGG1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。