OC-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406357

概要

ONECUT3は転写因子OC-3をコードしており、CUTドメインとホメオボックス型DNA結合ドメインを特徴とするonecutファミリーの一員です。これらのドメインは協調して、組織特異的な遺伝子発現プログラムを制御します。OC-3は、発生や代謝状態を形作る転写ネットワークを制御することで、細胞分化および系譜（ラインエージ）決定の調節に寄与します。ヒトの生物学においては、ONECUT3の発現パターンが上皮および肝臓における遺伝子制御回路の調節や、器官形成に関連する経路を含むより広範な転写制御と関連づけられています。onecutファミリーの活性異常は、分化・増殖の変化や腫瘍に伴う転写リプログラミングの文脈で検討されており、疾患関連の遺伝子ネットワークの機序研究における解析ノードとして有用であることが示唆されています。

OC-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるONECUT3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ONECUT3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ONECUT3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、OC-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、OC-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ONECUT3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• OC-3の機能に不可欠なONECUT3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ONECUT3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• OC-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびOC-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ONECUT3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  OC-3 HDRプラスミド（h）および OC-3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはONECUT3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のONECUT3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。