Partículas Lentivirales de Activación (m) OAZ: sc-430124-LAC

Zfp423 codifica el regulador transcripcional OAZ (también conocido como ZNF423), una proteína con múltiples dedos de zinc que actúa como andamiaje de unión al ADN e integra señales del desarrollo en programas de expresión génica específicos de cada tipo celular en el ratón. OAZ participa en redes transcripcionales vinculadas al neurodesarrollo y al compromiso del linaje adipocitario, y se ha implicado en la comunicación cruzada con vías como BMP/SMAD y con el control transcripcional asociado a la diferenciación. Al coordinar las interacciones entre potenciadores y promotores, Zfp423 ayuda a regular las transiciones del estado progenitor, la especificación del destino celular y la maduración en múltiples tejidos. Por ello, la actividad desregulada de Zfp423/OAZ es relevante para estudios de trastornos del desarrollo, diferenciación alterada y cambios en los circuitos transcripcionales asociados a enfermedades.

Las partículas de activación lentiviral OAZ (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Zfp423 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral OAZ (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Zfp423, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de OAZ. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Zfp423 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.