Plásmido CRISPR de Activación (h) OATP-C: sc-402898-ACT

SLCO1B1 codifica el polipéptido humano transportador de aniones orgánicos OATP‑C (OATP1B1), un transportador de captación multiespecífico enriquecido en hepatocitos que media la entrada independiente de sodio de ácidos biliares, conjugados de bilirrubina, metabolitos de hormonas esteroideas, hormonas tiroideas y diversos xenobióticos. Al controlar la importación sinusoidal hacia las células hepáticas, OATP‑C influye en el aclaramiento hepático, el reciclaje enterohepático y la exposición sistémica a metabolitos endógenos y sustratos de moléculas pequeñas. La actividad de SLCO1B1 se integra con rutas de desintoxicación y metabolismo coordinadas con enzimas de fase I/II y transportadores de eflujo ABC, configurando la interacción transportador–enzima en redes farmacocinéticas. La variación genética o la expresión desregulada se asocian con cambios en la disposición de fármacos y con susceptibilidad a reacciones adversas mediadas por transportadores, y se estudian en el contexto de la función hepática, la hiperbilirrubinemia y los mecanismos de interacciones fármaco–fármaco.

OATP-C El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLCO1B1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OATP-C El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLCO1B1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLCO1B1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OATP-C. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLCO1B1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OATP-C en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OATP-C en células tumorales con expresión de SLCO1B1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.