Plásmido CRISPR de Activación (r) Nurr1: sc-437375-ACT

Nurr1 (NR4A2) es un factor de transcripción receptor nuclear huérfano que regula programas génicos necesarios para la diferenciación, la supervivencia y la función sináptica de las neuronas dopaminérgicas en el sistema nervioso de la rata. Coordina la transcripción dependiente de la actividad e interactúa con vías que controlan la homeostasis mitocondrial, las respuestas al estrés oxidativo y la señalización neuroinflamatoria, moldeando la resiliencia y la plasticidad neuronal. La alteración de la expresión o la actividad de Nurr1 se ha vinculado con la disfunción de los circuitos dopaminérgicos del mesencéfalo y con cambios en los estados de activación microglial, lo que lo convierte en un nodo clave para estudios de mecanismos relevantes para la neurodegeneración. Como regulador transcripcional, Nurr1 también influye en la biosíntesis de catecolaminas y en genes implicados en el manejo de la dopamina, lo que respalda investigaciones sobre la identidad neuronal y la homeostasis de la señalización.

Nurr1 El plásmido de activación CRISPR (r) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nurr1 El plásmido de activación CRISPR (r) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional , donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nurr1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nurr1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nurr1 en células tumorales con expresión de silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.