Nurr1 CRISPR Activationプラスミド (r): sc-437375-ACT

Nurr1（NR4A2）は、ラットの神経系においてドーパミン作動性ニューロンの分化・生存・シナプス機能に必要な遺伝子プログラムを制御する、オーファン核内受容体型の転写因子です。活動依存的な転写を統合的に調節し、ミトコンドリア恒常性、酸化ストレス応答、神経炎症シグナルを制御する経路とも相互作用することで、神経細胞のレジリエンスと可塑性を形作ります。Nurr1の発現量や活性の変化は、中脳ドーパミン作動性回路の機能障害やミクログリアの活性化状態の変化と関連づけられており、神経変性に関わる機構の研究における重要な結節点となっています。転写調節因子としてのNurr1は、カテコールアミン生合成やドーパミンの取り込み・代謝に関わる遺伝子にも影響し、ニューロンのアイデンティティやシグナル恒常性に関する研究を支えます。

Nurr1 CRISPR活性化プラスミド（r）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Nurr1 CRISPR 活性化プラスミド (r) は、ヒト細胞株における 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体は転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Nurr1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然の遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNurr1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、および発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNurr1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。