Plásmido CRISPR de Activación (h) Nurr1: sc-400289-ACT

NR4A2 codifica el receptor nuclear huérfano Nurr1, un factor de transcripción que regula programas génicos que controlan la diferenciación neuronal, la homeostasis mitocondrial y la señalización antiinflamatoria. Nurr1 es un determinante clave del desarrollo y mantenimiento de las neuronas dopaminérgicas, al coordinar redes transcripcionales implicadas en la síntesis de dopamina, el transporte vesicular y las vías de respuesta al estrés. Interactúa con la señalización de receptores nucleares y con procesos de regulación de la cromatina para modular el destino celular y la supervivencia en condiciones de estrés inflamatorio u oxidativo. La actividad desregulada de NR4A2/Nurr1 se ha asociado con neurodegeneración y con una activación inmunitaria alterada, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de vías relacionadas con la enfermedad de Parkinson y con fenotipos neuroinflamatorios.

Nurr1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NR4A2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nurr1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NR4A2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NR4A2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nurr1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NR4A2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nurr1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nurr1 en células tumorales con expresión de NR4A2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.