Nup37 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409458-ACT

NUP37 codifica a Nup37, uma subunidade central do complexo Nup107–160, que serve de arcabouço para a montagem do complexo do poro nuclear (NPC) e dá suporte ao transporte nucleocitoplasmático seletivo. Ao contribuir para a biogênese e a permeabilidade do NPC, a Nup37 influencia o tráfego de RNA e proteínas, a progressão do ciclo celular e programas regulatórios do genoma que dependem de importação/exportação nuclear controlada. A expressão alterada ou a perturbação de nucleoporinas está associada a defeitos na fidelidade mitótica, no controle transcricional e nas respostas ao estresse, ligando a disfunção do NPC a fenótipos proliferativos e de desenvolvimento. Assim, NUP37 é relevante para estudar como a arquitetura do transporte nuclear se conecta à regulação da cromatina e a vias frequentemente desreguladas em estados celulares relacionados ao câncer.

Nup37 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NUP37 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nup37 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NUP37 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NUP37, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nup37. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NUP37 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nup37 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nup37 em células tumorais com expressão de NUP37 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.