Nup205 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404728-ACT

O NUP205 humano codifica a Nup205, um componente estrutural essencial do complexo do poro nuclear que contribui para a integridade do envelope nuclear e para o transporte nucleocitoplasmático seletivo. A Nup205 sustenta a montagem e a estabilidade da arquitetura do poro e influencia múltiplos processos ligados à regulação dependente de transporte, incluindo exportação de RNA, importação de proteínas e remodelamento nuclear associado ao ciclo celular. Ao moldar a eficiência e a seletividade da passagem de cargas, a Nup205 pode afetar programas transcricionais e respostas ao estresse que dependem de acesso nuclear regulado. A desregulação de componentes do poro nuclear, incluindo vias associadas à Nup205, é relevante para estudos de controle proliferativo e de fenótipos celulares observados em contextos de câncer e de neurodesenvolvimento ou neurodegeneração.

Nup205 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NUP205 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nup205 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NUP205 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NUP205, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nup205. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NUP205 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nup205 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nup205 em células tumorais com expressão de NUP205 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.